豬傳染性胸膜肺炎放線桿菌熒光PCR檢測試劑盒采用熒光PCR技術(shù),通過熒光信號的變化檢測豬傳染性胸膜肺炎放線桿菌(Actinobacillus pleuropneumoniae, APP)基因保守序列。該試劑盒適用于多種樣本(如口腔拭子、鼻咽拭子、扁桃體、豬肺組織、細菌培養(yǎng)物等)中豬傳染性胸膜肺炎放線桿菌特異性基因的檢測。
儲存條件及有效期:
試劑盒置于-20℃冰箱中凍存,試劑盒有效期為一年。
試劑盒使用方法:
1)從試劑盒中取出水、PCR反應(yīng)液、P溶液、陽性和陰性核酸對照,室溫融化,置冰箱4℃待用。
2)取待檢樣本(100μL)用柱法或磁珠法提取DNA,并溶于50μL水中。
3)反應(yīng)體系配制:試劑使用前,振蕩混勻,3000rpm離心2秒。
4)熒光PCR檢測儀循環(huán)條件設(shè)定
質(zhì)控標準:
陰性對照的CT值應(yīng)等于None;同時陽性對照的CT值應(yīng)小于30。
否則,此次試驗視為無效。(CT值應(yīng)以S型曲線拐點的循環(huán)數(shù)為準)
結(jié)果判定:
1)CT值為None的樣本判定為陰性;CT值小于等于38的樣本判定為陽性。
2)CT值大于38的樣本建議重做。重做后CT值為None判定為陰性,否則判定為陽性。
3)對于某些未呈現(xiàn)S型曲線,但本底較高的樣本,應(yīng)判定為陰性。